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如何正確地使用色譜柱

瀏覽次數(shù):1806發(fā)布日期:2023-05-08
  1、吸附柱色譜
  吸附色譜的原理:在一定條件下,硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用,這種作用主要是物理和化學作用兩種.物理作用來自于硅膠表表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力.化學作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。
  色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內(nèi)裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果。除另有規(guī)定外,通常多采用直徑為0.07~0.15mm的顆粒。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時的流速,均按各品種項下的規(guī)定。
  2、分配柱色譜
  方法和吸附柱色譜基本一致。裝柱前,先將載體和固定液混合,然后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊;供試品可溶于固定液,混以少量載體,加在預制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和,以避免洗脫過程中兩相分配的改變。
  色譜柱的大小規(guī)格由待分離樣品的量和吸附難易程度來決定。一般柱管的直徑為0.5~l0 cm,長度為直徑的10~40倍。填充吸附劑的量約為樣品重量的20~50倍,柱體高度應占柱管高度的3/4,柱子過于細長或過于粗短都不好。
  裝柱前,柱子應干凈、干燥,并垂直固定在鐵架臺上,將少量洗脫劑注入柱內(nèi),取一小團玻璃毛或脫脂棉用溶劑潤濕后塞入管中,用一長玻璃棒輕輕送到底部,適當搗壓,趕出棉團中的氣泡,但不能壓得太緊,以免阻礙溶劑暢流(如管子帶有篩板,則可省略該步操作)。再在上面加入一層約0.5 cm厚的潔凈細砂,從對稱方向輕輕叩擊柱管,使砂面平整。
  常用的裝柱方法有干裝法和濕裝法兩種。
  1、干裝法:在柱內(nèi)裝入2/3溶劑,在管口上放一漏斗,打開活塞,讓溶劑慢慢地滴入錐形瓶中,接著把干吸附劑經(jīng)漏斗以細流狀傾瀉到管柱內(nèi),同時用套在玻璃棒(或鉛筆等)上的橡皮塞輕輕敲擊管柱,使吸附劑均勻地向下沉降到底部。
  填充完畢后,用滴管吸取少量溶劑把粘附在管壁上的吸附劑顆粒沖入柱內(nèi),繼續(xù)敲擊管子直到柱體不再下沉為止。柱面上再加蓋一薄層潔凈細砂,把柱面上液層高度降至0.1~l cm,再把收集的溶劑反復循環(huán)通過柱體幾次,便可得到沉降得較緊密的柱體。
  2、濕裝法:基該方法與干裝法類似,所不同的是,裝柱前吸附劑需要預先用溶劑調(diào)成淤漿狀,在倒入淤漿時,應盡可能連續(xù)均勻地一次完成。如果柱子較大,應事先將吸附劑泡在一定量的溶劑中,并充分攪拌后過夜(排除氣泡),然后再裝。
  無論是干裝法,還是濕裝法,裝好的色譜柱應是充填均勻,松緊適宜一致,沒有氣泡和裂縫,否則會造成洗脫劑流動不規(guī)則而形成“溝流”,引起色譜帶變形,影響分離效果。
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